產(chǎn)品簡(jiǎn)介
隨機(jī)突變是闡述蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能之間的關(guān)系、改進(jìn)蛋白質(zhì)性能的重要工具。StarMut 隨機(jī)突變?cè)噭┖谢谝族e(cuò) PCR（error-prone PCR）技術(shù)，利用 Taq DNA polymerase 不具有 3′→5′ 校對(duì)功能的特性，在特定的反應(yīng)緩沖體系中，向擴(kuò)增的目的基因中引入隨機(jī)突變密碼子。帶有隨機(jī)突變的擴(kuò)增產(chǎn)物通過雙酶切，連接到表達(dá)載體中構(gòu)建文庫(kù)，然后轉(zhuǎn)化入表達(dá)宿主中，進(jìn)行蛋白活性篩選。如果經(jīng)一次突變反應(yīng)不能獲得滿意的結(jié)果，可采用連續(xù)易錯(cuò) PCR（sequential error-prone PCR）策略，即將一次 PCR 擴(kuò)增得到的有用突變基因作為下一次 PCR 擴(kuò)增的模板，連續(xù)反復(fù)地進(jìn)行隨機(jī)誘變，使每一次獲得的突變累積而產(chǎn)生更有意義的突變。本試劑盒包含有優(yōu)化的 2×StarMut Random System、StarMut Enhancer 和 Sterile Water 三種組分，使用時(shí)只需加入適量的 DNA 模板和合成的兩條擴(kuò)增引物，并用水補(bǔ)足體積，即可進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)，操作簡(jiǎn)便快速，大大減少了多次加樣可能造成的出錯(cuò)和污染機(jī)會(huì)。2×StarMut Random System 含有優(yōu)化濃度的 Taq DNA polymerase、dNTPs、反應(yīng)緩沖液和穩(wěn)定劑，可最大限度地克服常規(guī)易錯(cuò) PCR 技術(shù)中，由于 Taq DNA polymerase 本身的偏愛性造成的以 GC 突變?yōu)橹鞯娜秉c(diǎn)，獲得相對(duì)均衡的突變譜。堿基突變率可通過適量添加 StarMut Enhancer、調(diào)整模板 DNA 量和改變 PCR 擴(kuò)增循環(huán)數(shù)進(jìn)行控制。
下表列出以 10 ng 質(zhì)粒 DNA 為模板，PCR 擴(kuò)增一條 1 kb DNA 片段（20個(gè)循環(huán)）后測(cè)序檢測(cè)得到的突變率結(jié)果。需要注意的是，由于不同 DNA 模板的堿基組成不同、長(zhǎng)度不一，以及不同引物的擴(kuò)增效率存在差異，所以即使在相同的 PCR 反應(yīng)條件下，兩組 PCR 產(chǎn)物所得到的突變率也可能不同。因此我們建議根據(jù)實(shí)驗(yàn)的具體要求，首先進(jìn)行多個(gè)小體系（20 μl）擴(kuò)增預(yù)實(shí)驗(yàn)，分別加入不同體積的 StarMut Enhancer（如 0 μl、1μl、5 μl、10 μl 等），摸索出符合目標(biāo)突變率的反應(yīng)條件后，再放大擴(kuò)增體系。其他影響突變率的因素見【注意事項(xiàng)】。
以 50 µl PCR 反應(yīng)體系為例：
| 反應(yīng)條件 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
|---|---|---|---|---|---|---|
| StarMut Enhancer（μl） | 0 | 1 | 2.5 | 5 | 10 | 20 |
| 突變堿基的個(gè)數(shù)/1 kb | 0~1 | 0~3 | 0~4 | 1~6 | 3~10 | 5~18 |
| 平均突變堿基數(shù)/1 kb | 0.3 | 1.6 | 2.3 | 4.1 | 6.5 | 10.2 |
產(chǎn)品組分
| 組分貨號(hào) | 組分名稱 | T115-01 |
|---|---|---|
| ZT115-101 | 2×StarMut Random PCR Mix | 500 μl |
| ZT115-102 | StarMut Enhancer | 400 μl |
| ZA129-101 | Sterile Water | 1 ml |
保存條件
-20℃ 保存，保質(zhì)期 12 個(gè)月；經(jīng)常使用，可于 4℃ 保存，保質(zhì)期 3 個(gè)月。
產(chǎn)品變更
該產(chǎn)品原中文名稱為：StarMut 隨機(jī)突變?cè)噭┖?。?2022.4.12 起變更為現(xiàn)用名。
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